人的核糖体蛋白S3a基因克隆、表达、纯化与亚细胞定位

刘莹; 厉建中; 张俊平

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人的核糖体蛋白S3a基因克隆、表达、纯化与亚细胞定位

刘莹, 厉建中, 张俊平

文章导航 > 药学实践与服务 > 2011 > 29(2): 97-100

刘莹, 厉建中, 张俊平. 人的核糖体蛋白S3a基因克隆、表达、纯化与亚细胞定位[J]. 药学实践与服务, 2011, 29(2): 97-100.

引用本文:

刘莹, 厉建中, 张俊平. 人的核糖体蛋白S3a基因克隆、表达、纯化与亚细胞定位[J]. 药学实践与服务, 2011, 29(2): 97-100.

LIU Ying, LI Jian-zhong, ZHANG Jun-ping. Cloning,expression,purification and subcellular localization of human ribosomal protein S3a[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2011, 29(2): 97-100.

Citation:

LIU Ying, LI Jian-zhong, ZHANG Jun-ping. Cloning,expression,purification and subcellular localization of human ribosomal protein S3a[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2011, 29(2): 97-100.

人的核糖体蛋白S3a基因克隆、表达、纯化与亚细胞定位

第二军医大学药学院生化药学教研室,上海 200433

基金项目: 国家自然科学基金(30600766和30871353).

Cloning,expression,purification and subcellular localization of human ribosomal protein S3a

LIU Ying,

LI Jian-zhong,

ZHANG Jun-ping

School of pharmacy ,Second military medical university ,Shanghai 200433, China

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摘要: 目的克隆人核糖体蛋白S3a (Ribosomal protein S3a, RPS3a)基因,并表达、纯化其蛋白,分析RPS3a蛋白的细胞定位,为其功能研究奠定基础。方法应用RT-PCR从人胚肾HEK293细胞的总RNA中反转录并扩增出RPS3a基因,克隆到原核表达载体PET-21a中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)进行蛋白表达。在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下,PET21a-RPS3a融合表达载体在大肠杆菌菌株BL21(DE3)中以可溶性蛋白的形式高效表达RPS3a蛋白,超声破碎细胞,通过Ni²⁺-NTA亲和层析柱初步纯化,再应用50 kD超滤膜进一步纯化。用Western Blot印迹实验检测纯化后的蛋白。构建绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP )的pEGFP-N1-RPS3a表达载体,转染HEK293细胞,通过荧光显微镜观察RPS3a重组荧光蛋白在细胞内的分布。结果获得了较高纯度的RPS3a蛋白,亚细胞定位分析表明RPS3a蛋白主要分布于细胞质。结论成功克隆了RPS3a基因并表达纯化了其蛋白,确定其亚细胞分布,为进一步研究RPS3a蛋白的性质和功能奠定了基础。

关键词:
核糖体蛋白S3a /

原核表达 /

蛋白纯化 /

亚细胞定位

Abstract: Objective To express and purify the human ribosomal protein S3a and study the subcellular localization of human ribosomal protein S3a. Methods The RPS3a gene was obtained by RT-PCR, total RNA extracted from human HEK293 cell as the template,and cloned into the prokaryotic expressing vector PET-21a to form PET21a-RPS3a, then transferred into (Escherichia coli)BL21(DE3). PET21a-RPS3a was highly expressed in (Escherichia coli)BL21(DE3) in the presence of isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside (IPTG) and most products existed in a soluble form. After ultrasonication, recombinant fusion proteins were purified by Ni²⁺-NTA affinity chromatography and 50 kD ultrafiltration membrane, the purity of RPS3a was further confirmed by Western Blot analysis. The full sequence of RPS3a gene was recombined in the downstream of the green fluorescent protein gene in the EGFP-N1 vector.The recombined pEGFP-N1-RPS3a vector was transfected into human kidney epithelial cells (293 cells), through the subcellular localization, which was observed RPS3a recombinant fluorescent protein in the cell distribution. Results The higher purity of recombinant fusion protein was obtained. Subcellular localization analysis confirmed that RPS3a recombinant fluorescent protein distributed mainly in the cytoplasm. Conclusion The recombinant fusion protein PET21a-RPS3a was successfully cloned, expressed, purified. Application of subcellular localization raises the foundation to the study on nature and function of human RPS3a protein.

Key words:
ribosomal protein S3a(RPS3a) /

prokaryotic expression /

protein purification /

subcellular localization

[1] Lindstrom MS. Emerging functions of ribosomal proteins in gene-specific transcription and translation[J].Biochem Biophys Res Commun, 2009, 379(2):167.

[2] Metspalu A ,Rebane A, Hoth S,et al.Human ribosomal protein S3a: cloning of the cDNA and primary structure of the protein[J]. Gene, 1992, 119(2): 313.

[3] Kho CJ, Zarbl H. Fte-1, a v-fos Transformation Effector Gene, Encodes the MammalianHomologue of a Yeast Gene Involved in Protein Import into Mitochondria[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 1992, 89: 2200.

[4] Chan YL,Olvera J,Paz V,et al.The primary structures of rat ribosomal proteins S3a (the V-Fos transformation effector) and of S3b[J]. Biochem Biophys Res Commun, 1996, 228(1): 141.

[5] Lecomte F,Lecomte F,Szpirer J,et al.The S3a ribosomal protein gene is identical to the Fte-1 (v-fos transformation effector) gene and the TNF-alpha]induced TU-11 gene, and its transcript level is altered in transformed and tumor cells[J]. Gene, 1997, 186(2): 271.

[6] Naora H,Nishida T,Shindo Y,et al.Association of nbl gene expression and glucocorticoid-induced apoptosis in mouse thymus in vivo[J]. Immunology, 1995, 85(1): 63.

[7] Cui K,Coutts M,Stahl J,et al.Novel interaction between the transcription factor CHOP (GADD153) and the ribosomal protein FTE/S3a modulates erythropoiesis[J]. J Biol Chem, 2000, 275(11): 7591.

[8] Kashuba E,Yurchenko M,Szirak K,et al. Epstein-Barr virus-encoded EBNA-5 binds to Epstein-Barr virus-induced Fte1/S3a protein[J]. Exp Cell Res , 2005, 303: 47.

[9] Hu ZB,Minden MD,Mcculloch EA, et al. Regulation of drug sensitivity by ribosomal protein S3a[J]. Blood, 2000, 95(3): 1047.

[10] Song D, Sakamoto S,Taniguchi T.Inhibition of Poly(ADP-ribose) Polymerase Activity by Bcl-2 in Association with the Ribosomal Protein S3a[J]. Biochemistry, 2002, 41(3): 929.

[1] 迟文雅, 袁艳, 李伟林, 吴茼妤, 俞媛. 负载骨髓间充质干细胞/白藜芦醇脂质体的水凝胶支架治疗创伤性脑损伤的研究 . 药学实践与服务, 2025, 43(2): 67-74. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202406034

[2] 曹奇, 张嘉宝, 王培. 基于无监督自动降维分析与手动圈门联用的骨骼肌髓系细胞多色流式分析方法 . 药学实践与服务, 2025, 43(3): 118-122. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202404077

[3] 徐尧, 马春辉, 李志勇. 高血压对心血管纤维化及sFRP2表达的影响 . 药学实践与服务, 2025, 43(): 1-5. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202409055

[4] 杨贺英, 罗彩萍, 彭婷, 梁文仪, 沈颂章, 苏娟. 花椒生物碱富集纯化工艺优化及其成分分析 . 药学实践与服务, 2025, 43(2): 75-81. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202404066

[5] 乔方良, 蒋益萍, 夏天爽, 刘爱军, 赵凯, 辛海量. 对萼猕猴桃苷E提取分离纯化工艺的研究 . 药学实践与服务, 2025, 43(): 1-7. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202407001

[6] 冯婷婷, 张景翔, 王彦, 许维恒, 张俊平. ANXA3基因及蛋白的研究进展 . 药学实践与服务, 2025, 43(2): 47-50, 74. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202309023

[7] 桂明珠, 李静, 李志玲. 儿童伏立康唑的血药浓度与CYP2C19、CYP2C9和CYP3A5基因多态性的相关性研究 . 药学实践与服务, 2024, 42(): 1-5. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202402020

[8] 毛智毅, 王筱燕, 陈晓颖, 汤逸斐. 度拉糖肽联合二甲双胍对肥胖型2型糖尿病患者机体代谢、体脂成分及血清脂肪因子的影响 . 药学实践与服务, 2024, 42(7): 305-309. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202305032

[9] 刘丽艳, 余小翠, 孙传铎. 纳武利尤单抗治疗非小细胞肺癌有效性及安全性的Meta分析 . 药学实践与服务, 2024, 42(10): 451-456. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202310044

[10] 宋雨桐, 夏德润, 顾珩, 唐少文, 易洪刚, 沃红梅. 帕博利珠单抗与铂类化疗方案在晚期非小细胞肺癌一线治疗中的药物经济学评价 . 药学实践与服务, 2024, 42(8): 334-340. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202303023

[11] 冯志惠, 邓仪卿, 叶冰, 安培, 张宏, 张海军. 雀梅藤石油醚提取物诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡的实验研究 . 药学实践与服务, 2024, 42(6): 253-259. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202311055

[12] 修建平, 杨朝爱, 刘禧澳, 潘乾禹, 韦广旭, 王卫星. 全反式维甲酸对肝星状细胞活化及氧化应激的作用和机制探索 . 药学实践与服务, 2024, 42(7): 291-296. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202312054

[13] 姜涛, 徐卫凡, 蒋益萍, 夏天爽, 辛海量. 巴戟天丸组方对Aβ损伤成骨细胞的作用及基于网络药理学的机制研究 . 药学实践与服务, 2024, 42(7): 285-290, 296. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202305011

[14] 杨媛媛, 安晓强, 许佳捷, 江键, 梁媛媛. 正极性驻极体联合5-氟尿嘧啶对瘢痕成纤维细胞生长抑制的协同作用 . 药学实践与服务, 2024, 42(6): 244-247. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202310027

[15] 王雪莲, 郑斯莉, 李志勇, 罗亨宇, 缪朝玉. 全身过表达人METRNL基因小鼠模型的构建与验证 . 药学实践与服务, 2024, 42(5): 198-202, 222. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202311014

[16] 白学鑫, 陈玉平, 盛春泉, 武善超. 具核梭杆菌小分子抑制剂的筛选及其抗结直肠癌活性研究 . 药学实践与服务, 2024, 42(12): 503-507. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202405009

[17] 姚瑞阳, 于海征, 李耀盺, 张磊. 丹参FBXL 基因家族的鉴定和表达模式分析 . 药学实践与服务, 2024, 42(11): 461-470. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202407034

[18] 白云俊, 赵玉洋, 金艳, 付璐, 袁媛. 蓝草类药材基原植物叶片表皮显微结构研究 . 药学实践与服务, 2024, 42(): 1-6. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202404069

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出版历程

收稿日期: 2010-06-09

修回日期: 2010-09-12

人的核糖体蛋白S3a基因克隆、表达、纯化与亚细胞定位

刘莹,

厉建中,

张俊平

第二军医大学药学院生化药学教研室,上海 200433

基金项目: 国家自然科学基金(30600766和30871353).

收稿日期: 2010-06-09

修回日期: 2010-09-12

关键词:

核糖体蛋白S3a /
原核表达 /
蛋白纯化 /
亚细胞定位

摘要: 目的克隆人核糖体蛋白S3a (Ribosomal protein S3a, RPS3a)基因,并表达、纯化其蛋白,分析RPS3a蛋白的细胞定位,为其功能研究奠定基础。方法应用RT-PCR从人胚肾HEK293细胞的总RNA中反转录并扩增出RPS3a基因,克隆到原核表达载体PET-21a中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)进行蛋白表达。在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下,PET21a-RPS3a融合表达载体在大肠杆菌菌株BL21(DE3)中以可溶性蛋白的形式高效表达RPS3a蛋白,超声破碎细胞,通过Ni²⁺-NTA亲和层析柱初步纯化,再应用50 kD超滤膜进一步纯化。用Western Blot印迹实验检测纯化后的蛋白。构建绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP )的pEGFP-N1-RPS3a表达载体,转染HEK293细胞,通过荧光显微镜观察RPS3a重组荧光蛋白在细胞内的分布。结果获得了较高纯度的RPS3a蛋白,亚细胞定位分析表明RPS3a蛋白主要分布于细胞质。结论成功克隆了RPS3a基因并表达纯化了其蛋白,确定其亚细胞分布,为进一步研究RPS3a蛋白的性质和功能奠定了基础。

English Abstract

刘莹, 厉建中, 张俊平. 人的核糖体蛋白S3a基因克隆、表达、纯化与亚细胞定位[J]. 药学实践与服务, 2011, 29(2): 97-100.

引用本文: 刘莹, 厉建中, 张俊平. 人的核糖体蛋白S3a基因克隆、表达、纯化与亚细胞定位[J]. 药学实践与服务, 2011, 29(2): 97-100.

LIU Ying, LI Jian-zhong, ZHANG Jun-ping. Cloning,expression,purification and subcellular localization of human ribosomal protein S3a[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2011, 29(2): 97-100.

Citation: LIU Ying, LI Jian-zhong, ZHANG Jun-ping. Cloning,expression,purification and subcellular localization of human ribosomal protein S3a[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2011, 29(2): 97-100.

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[1]	Lindstrom MS. Emerging functions of ribosomal proteins in gene-specific transcription and translation[J].Biochem Biophys Res Commun, 2009, 379(2):167.
[2]	Metspalu A ,Rebane A, Hoth S,et al.Human ribosomal protein S3a: cloning of the cDNA and primary structure of the protein[J]. Gene, 1992, 119(2): 313.
[3]	Kho CJ, Zarbl H. Fte-1, a v-fos Transformation Effector Gene, Encodes the MammalianHomologue of a Yeast Gene Involved in Protein Import into Mitochondria[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 1992, 89: 2200.
[4]	Chan YL,Olvera J,Paz V,et al.The primary structures of rat ribosomal proteins S3a (the V-Fos transformation effector) and of S3b[J]. Biochem Biophys Res Commun, 1996, 228(1): 141.
[5]	Lecomte F,Lecomte F,Szpirer J,et al.The S3a ribosomal protein gene is identical to the Fte-1 (v-fos transformation effector) gene and the TNF-alpha]induced TU-11 gene, and its transcript level is altered in transformed and tumor cells[J]. Gene, 1997, 186(2): 271.
[6]	Naora H,Nishida T,Shindo Y,et al.Association of nbl gene expression and glucocorticoid-induced apoptosis in mouse thymus in vivo[J]. Immunology, 1995, 85(1): 63.
[7]	Cui K,Coutts M,Stahl J,et al.Novel interaction between the transcription factor CHOP (GADD153) and the ribosomal protein FTE/S3a modulates erythropoiesis[J]. J Biol Chem, 2000, 275(11): 7591.
[8]	Kashuba E,Yurchenko M,Szirak K,et al. Epstein-Barr virus-encoded EBNA-5 binds to Epstein-Barr virus-induced Fte1/S3a protein[J]. Exp Cell Res , 2005, 303: 47.
[9]	Hu ZB,Minden MD,Mcculloch EA, et al. Regulation of drug sensitivity by ribosomal protein S3a[J]. Blood, 2000, 95(3): 1047.
[10]	Song D, Sakamoto S,Taniguchi T.Inhibition of Poly(ADP-ribose) Polymerase Activity by Bcl-2 in Association with the Ribosomal Protein S3a[J]. Biochemistry, 2002, 41(3): 929.

[1]	迟文雅, 袁艳, 李伟林, 吴茼妤, 俞媛. 负载骨髓间充质干细胞/白藜芦醇脂质体的水凝胶支架治疗创伤性脑损伤的研究 . 药学实践与服务, 2025, 43(2): 67-74. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202406034
[2]	曹奇, 张嘉宝, 王培. 基于无监督自动降维分析与手动圈门联用的骨骼肌髓系细胞多色流式分析方法 . 药学实践与服务, 2025, 43(3): 118-122. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202404077
[3]	徐尧, 马春辉, 李志勇. 高血压对心血管纤维化及sFRP2表达的影响 . 药学实践与服务, 2025, 43(): 1-5. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202409055
[4]	杨贺英, 罗彩萍, 彭婷, 梁文仪, 沈颂章, 苏娟. 花椒生物碱富集纯化工艺优化及其成分分析 . 药学实践与服务, 2025, 43(2): 75-81. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202404066
[5]	乔方良, 蒋益萍, 夏天爽, 刘爱军, 赵凯, 辛海量. 对萼猕猴桃苷E提取分离纯化工艺的研究 . 药学实践与服务, 2025, 43(): 1-7. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202407001
[6]	冯婷婷, 张景翔, 王彦, 许维恒, 张俊平. ANXA3基因及蛋白的研究进展 . 药学实践与服务, 2025, 43(2): 47-50, 74. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202309023
[7]	桂明珠, 李静, 李志玲. 儿童伏立康唑的血药浓度与CYP2C19、CYP2C9和CYP3A5基因多态性的相关性研究 . 药学实践与服务, 2024, 42(): 1-5. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202402020
[8]	毛智毅, 王筱燕, 陈晓颖, 汤逸斐. 度拉糖肽联合二甲双胍对肥胖型2型糖尿病患者机体代谢、体脂成分及血清脂肪因子的影响 . 药学实践与服务, 2024, 42(7): 305-309. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202305032
[9]	刘丽艳, 余小翠, 孙传铎. 纳武利尤单抗治疗非小细胞肺癌有效性及安全性的Meta分析 . 药学实践与服务, 2024, 42(10): 451-456. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202310044
[10]	宋雨桐, 夏德润, 顾珩, 唐少文, 易洪刚, 沃红梅. 帕博利珠单抗与铂类化疗方案在晚期非小细胞肺癌一线治疗中的药物经济学评价 . 药学实践与服务, 2024, 42(8): 334-340. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202303023
[11]	冯志惠, 邓仪卿, 叶冰, 安培, 张宏, 张海军. 雀梅藤石油醚提取物诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡的实验研究 . 药学实践与服务, 2024, 42(6): 253-259. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202311055
[12]	修建平, 杨朝爱, 刘禧澳, 潘乾禹, 韦广旭, 王卫星. 全反式维甲酸对肝星状细胞活化及氧化应激的作用和机制探索 . 药学实践与服务, 2024, 42(7): 291-296. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202312054
[13]	姜涛, 徐卫凡, 蒋益萍, 夏天爽, 辛海量. 巴戟天丸组方对Aβ损伤成骨细胞的作用及基于网络药理学的机制研究 . 药学实践与服务, 2024, 42(7): 285-290, 296. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202305011
[14]	杨媛媛, 安晓强, 许佳捷, 江键, 梁媛媛. 正极性驻极体联合5-氟尿嘧啶对瘢痕成纤维细胞生长抑制的协同作用 . 药学实践与服务, 2024, 42(6): 244-247. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202310027
[15]	王雪莲, 郑斯莉, 李志勇, 罗亨宇, 缪朝玉. 全身过表达人METRNL基因小鼠模型的构建与验证 . 药学实践与服务, 2024, 42(5): 198-202, 222. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202311014
[16]	白学鑫, 陈玉平, 盛春泉, 武善超. 具核梭杆菌小分子抑制剂的筛选及其抗结直肠癌活性研究 . 药学实践与服务, 2024, 42(12): 503-507. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202405009
[17]	姚瑞阳, 于海征, 李耀盺, 张磊. 丹参FBXL 基因家族的鉴定和表达模式分析 . 药学实践与服务, 2024, 42(11): 461-470. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202407034
[18]	白云俊, 赵玉洋, 金艳, 付璐, 袁媛. 蓝草类药材基原植物叶片表皮显微结构研究 . 药学实践与服务, 2024, 42(): 1-6. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202404069
[19]	刘汝雄, 杨万镇, 涂杰, 盛春泉. 铁死亡调控蛋白GPX4的小分子抑制剂研究进展 . 药学实践与服务, 2024, 42(9): 375-378. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202312075

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人的核糖体蛋白S3a基因克隆、表达、纯化与亚细胞定位

Cloning,expression,purification and subcellular localization of human ribosomal protein S3a

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人的核糖体蛋白S3a基因克隆、表达、纯化与亚细胞定位

第二军医大学药学院生化药学教研室,上海 200433

English Abstract

Cloning,expression,purification and subcellular localization of human ribosomal protein S3a

School of pharmacy ,Second military medical university ,Shanghai 200433, China

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